O Multi-Card Play é uma das grandes inovações do port do Resident Evil original para o Nintendo DS. Aqui, até quatro jogadores podem jogar juntos em três cenários: Mansão, Guardhouse e Laboratório, escolhendo não somente os personagens jogáveis no game normal, como também os policiais da equipe Bravo e até mesmo Albert Wesker. O jogo utiliza a conexão sem fio do DS, mas não é possível jogar pela internet. Os jogadores devem estar na mesma sala, cada um com seu aparelho e seu game. As restrições do console, entretanto, impedem que os jogadores sejam vistos um pelo outro na tela. Uma seta substitui os outros players na versão japonesa e, na americana, uma estrela indica a localização deles.
As armas e munições encontradas nos cenários não são compartilhadas por todos; ou seja, caso uma arma seja coletada pelo jogador um, ela ainda estará lá para todos os outros. A exceção são os baús especiais, localizados em determinadas salas, que normalmente contém armas mais poderosas. Neste caso, não é possível pegá-las uma vez que outro player já tenha passado por lá. Os inimigos também são compartilhados e, apesar de exibirem animações diferentes para cada um dos jogadores, simplesmente caem em todas as outras telas quando são mortos.
No modo Co-op, todos devem trabalhar juntos para escapar com vida da área, utilizando das armas encontradas pelo local e auxiliando uns aos outros. No modo Versus, vence quem matar mais inimigos e terminar o cenário mais rápido, com pontos sendo distribuídos de acordo com o nível de dano sofrido, execução de critical hits ao estar em primeira pessoa e rapidez ao se terminar o cenário. Todos os modos, porém, tem a mesma quantidade de inimigos e deve-se matar os mesmos chefes antes de se terminar.
