Claire Redfield
Três meses após o desastre em Raccoon City, Claire Redfield invade uma das instalações da Umbrella na França, onde é capturada e levada para a Ilha Rockfort. Lá, ela se vê mais uma vez envolta em um pesadelo orquestrado por Albert Wesker e Alfred Ashford e não medirá esforços até encontrar seu irmão, Chris Redfield.
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Chris Redfield
Respondendo ao chamado de sua irmã, Chris vai até a Ilha Rockfort para salvá-la. Chris é um ex-integrante dos S.T.A.R.S., cujo único objetivo é dar um fim às atividades ilegais da Umbrella. Chris jamais poderia imaginar que encontraria seu arqui-inimigo nesta aventura.
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Steve Burnside
Um dos prisioneiros da Ilha Rockfort, Steve tem somente 17 anos e teve sua família destruída pela Umbrella Corporation. Assim como Claire, ele escapou em meio ao caos instaurado após o ataque e une forças com a jovem para sobreviver àquele pesadelo.
Alfred Ashford
Descendente direto de um dos criadores da Umbrella, Alfred tem uma personalidade insana e um amor incomensurável por sua irmã gêmea, Alexia. Ele acredita que Claire foi a responsável pelo ataque à base militar da Umbrella na Ilha Rockfort, responsabilidade sua desde a morte de seu pai, Alexander.
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Alexia Ashford
A irmã de Alfred possui uma inteligência fora do normal. Promovida a pesquisadora com somente 10 anos, foi a líder do projeto de desenvolvimento do T-Veronica, um novo vírus baseado em formigas vermelhas. Sua devoção ao projeto, entretanto, atingiu níveis extremos.
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Rodrigo Juan Javal
Responsável pela prisão de Claire Redfield, é um dos oficiais de segurança da Umbrella. Após o ataque e vazamento do vírus, liberta a garota e, ferido, decide ficar para trás e aguardar a própria morte.
Albert Wesker
O traidor dos S.T.A.R.S., que todos acreditavam estar morto, vai até a Ilha Rockfort em busca do vírus T-Veronica. Wesker também está por trás do ataque à ilha e conseqüente liberação do vírus. Inescrupuloso e frio, possui agora um poder que ultrapassa as capacidades de qualquer ser humano normal.
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